높은 단백질 수율을 얻기 위한 xTractor™ Buffer
xTractor™ Buffer를 사용하면 스케일에 상관없이 tag 단백질을 빠르고 쉽게 정제하여 시간을 절약할 수 있다.
xTractor™ Buffer (Code 635671외)의 우수한 성능
- 단 10분 처리로도 fresh 또는 냉동된 bacteria, mammalian, yeast 세포와 baculovirus에 감염된 세포의 lysate제작 가능
- Sonication 방법보다 타겟 단백질의 생물학적 활성 유지에 용이
- xTractor™ Buffer Kit의 구성품을 활용하여 고분자 단백질의 회수율 극대화
■ Simple protocol
당사의 xTractor™ Buffer는 단백질을 정제하기 전에 bacteria를 안전하고 효율적으로 lysis 한다. 아래와 같이 세포 pellet을 buffer (1:20 w/v)에 풀어주고 10분 동안 부드럽게 섞으면 간단한 방법으로 단백질을 추출할 수 있다.
처리시간이 짧기 때문에 단백질분해효소 (protease)에 민감한 단백질에 최적이며, 매우 효율적으로 세포막을 lysis하여 더욱 높은 순도와 수율로 단백질을 정제할 수 있다. 추출 후에는 lysate를 원심분리하거나 여과하여 원하는 정제 컬럼에 로딩하면 된다. 본문에서는 his-tag된 단백질을 정제하기 위해
TALON® Metal Affinity Resin (Code 635504 외)을 사용하였다.
■ Sonication
xTractor™ Buffer는 마일드하면서 변성시키지 않는 제형 덕분에 단백질 정제 수율을 더 높이면서 sonication 방법보다 재조합 단백질의 생물학적 활성을 더 잘 유지할 수 있다. 아래 표시된 각 조건에서 his-tagged β-galactosidase (왼쪽 gel) 또는 his-tagged GFPuv 단백질 (오른쪽 gel)을 발현하는
E.coli 세포의 1.7 g pellet에서 단백질을 분리하였다. 1, 3번 lane은 total lysate이며, 2, 4번 lane은 컬럼 정제 후의 타겟 단백질을 보여준다. 특히 고분자량 단백질인 β-galactosidase에서도 회수율이 높다는 점을 확인할 수 있다.
그림 1. β-gal, GFPuv의 회수율 향상: xTractor™ Buffer vs. sonication
xTractor™ 방법은 단백질을 변성시키거나 절단시키지 않기 때문에 단백질에서 중요한 생물학적 활성을 더 잘 유지할 수 있다. 아래 표는 xTractor™ Buffer의 높은 수율과 활성 유지를 나타낸다. 단백질 활성은 상대발광 (β-gal)과 상대형광 (GFPuv) 단위로 나타냈다.
xTractor™ Buffer와 sonication법을 비교 |
단백질 |
추출 방법 |
Fraction |
수율 (mg) |
활성 |
β-Gal |
Sonication |
Total lysate |
28.6 |
872 |
Purified protein |
0.6 |
2,115 |
xTractor™ Buffer Kit (lysozyme, DNase I 함께 처리) |
Total lysate |
122.1 |
2,277 |
Purified protein |
0.9 |
3,054 |
GFPuv |
Sonication |
Total lysate |
40.7 |
2,247 |
Purified protein |
1.5 |
3,426 |
xTractor™ Buffer |
Total lysate |
87.0 |
2,142 |
Purified protein |
1.8 |
3,514 |
■ High MW
고분자 단백질은 세포막이 완전히 lysis 되지 않으면 추출이 어렵기 때문에 xTractor™ Buffer Kit에 포함된 lysozyme과 DNase I을 추가할 수 있다.
E.coli pellet에서 단백질 추출할 때 lysozyme을 첨가하면 crude lysate에서 고분자 단백질을 더 많이 회수할 수 있었다.
그림 2. 고분자 단백질의 회수율 향상: xTractor™ Buffer alone vs. xTractor™ Buffer Kit (lysozyme 포함)
■ Conclusion
당사의 xTractor™ Buffer는 생물학적 활성을 더 잘 유지할 수 있는 마일드한 제형으로, 모든 스케일의 샘플에서 빠르고 쉽게 고수율로 단백질 추출이 가능하다. 기존 방법에서는 extraction buffer의 formulation이 필요하거나 샘플 손실 가능성 (예: sonication 처리로 인한 버블 발생)이 있다. 당사의 xTractor™ buffer는 즉시 사용이 가능한 형태로
편리하고 우수한 성능을 제공하여 연구 효율을 높일 수 있다.
■ 관련 제품
Code |
제품명 |
용량 |
구성 |
635623 |
xTractor™ Buffer Kit |
1 Set |
1X xTractor™ Buffer
100X Lysozyme
DNase (5 units/ml) |
635656 |
xTractor™ Buffer |
100 ㎖ |
xTractor™ Buffer |
635671 |
250 ㎖ |
635625 |
250 ㎖ x 2
(635671 x 2) |
