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dsRNA 생성 최소화, 높은 캡핑 효율을 실현

[GMP grade] PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)
Takara	T2422S001	PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) GMP grade	200 KU	가격문의
Takara	T2422S010	PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) GMP grade	2,000 KU	가격문의
Takara	T2422S100	PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) GMP grade	20,000 KU	가격문의
Takara	T2401S010	10X IVT Reaction Buffer GMP grade	10 ml	가격문의
Takara	T2401S100	10X IVT Reaction Buffer GMP grade	100 ml	가격문의
Takara	T2401S500	10X IVT Reaction Buffer GMP grade	500 ml	가격문의

Product index

in vitro transcription

PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) (Code 2560A)의 GMP grade 제품
mRNA 합성 과정에서 dsRNA 생성을 최소화하여 생체 투여 시 면역원성을 감소
다양한 GMP 가이드라인 (ICH Q7, PIC/S GMP)을 참조한 관리 기준에 따라 제조 및 품질 관리
인체ㆍ동물 유래 성분 및 β-lactam 화합물 free
CleanCap^® Reagent AG와 같은 cap analog와 함께 사용하면 고효율 Capping 및 고수율 mRNA 합성 가능

제품설명

PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) GMP grade는 T7 RNA Polymerase^*1를 업그레이드하여, dsRNA 생성을 최소화한 RNA polymerase이다. Cap analog dependent한 RNA합성이 가능하고, 내열성 (~52℃)을 가지도록 개량되었다.

본 효소와 CleanCap^® Reagent AG (TriLink) 등의 cap analog를 10X IVT Reaction Buffer GMP grade (Code T2401S010 외/별도판매)로 IVT하면, dsRNA 생성을 최소화하고 높은 capping 효율로 고품질 mRNA를 대량 제조할 수 있다.

^*1 NTP를 기질로 double-stranded DNA에서 T7 promoter의 downstream 영역을 RNA로 합성 (transcription)하는 효소

그림. FLuc mRNA의 합성 수율 및 dsRNA 생성 억제 효과 (PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) (Code 2560A)): 자세한 내용 바로가기

용도

- Cap analog를 사용한 capped mRNA 합성 (co-transcriptional capping)
- Enzymatic capping (또는 번역 후 capping)에 사용되는 mRNA 합성 (cap analog 사용 시보다 수율이 5~30% 감소할 수 있음)

상업적 생산 용도로 사용 시, 다카라코리아 고객지원 (TEL. 02-2081-2510, Email. [email protected])으로 연락 주세요.

품질 관리

- GMP 관련 각종 가이드라인 (ICH Q7, PIC/S GMP)을 참조한 관리 기준에 따라 제조 및 품질관리: 자세한 내용 바로가기 품질 등급(RUO/HQ/GMP)이란?
- 인체ㆍ동물 유래 성분을 포함하지 않으며, β-lactam 계열의 화합물을 사용하지 않은 1차 원료를 사용함

품질 보증 문서 제공

Certificate of Origin (CoO), Statement of compliance (SOC), β-lactam계 화합물 미사용 등의 증명서 발급 가능 (발급 요청은 별도 문의)

내용

GMP grade 제품은 효소와 버퍼를 개별적으로 판매

보관온도

－20±5℃

유효기간

CoA 및 제품 라벨을 참조 (자세한 내용은 별도 문의)

농도

200 U/㎕

기원

Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase variant

일반적 특성

분자량: 약 99.8 kDa
보조인자: Mg²⁺

활성의 정의

37℃에서 1시간 동안 0.25 ㎍의 1.9 kb FLuc RNA를 생성하는 효소량을 1 U로 한다.

활성 측정용 반응 액 조성

1X IVT Reaction Buffer GMP grade
10 mM ATPㆍCTPㆍGTPㆍUTP
0.9 ㎍/20 ㎕ 선형화된 FLuc 플라스미드 DNA

품질 관리 데이터

성능 테스트 결과는 각 lot의 CoA (Certificate of Analysis) 참고

주의 사항

본 효소를 강하게 교반하지 마십시오.
RNase가 혼입되지 않도록 주의해야 하며, RNase가 혼입되면 반응 후 얻어진 RNA의 수율이 감소하거나 RNA가 단편화 될 수 있습니다.
일정한 길이의 RNA 합성을 위해 선형화된 plasmid 혹은 PCR 산물같은 linearized dsDNA를 사용해야 하며, 원치 않은 형태의 RNA 합성을 방지하기 위해 template DNA의 3’ 말단은 5’-protruding 혹은 blunt 형태를 추천합니다.
10X IVT Reaction Buffer GMP grade에는 spermidine이 포함되어 있습니다. Spermidine은 핵산과 복합체를 형성하여 경우에 따라 불용성 물질로 침전될 수 있으므로, 주형 DNA는 반드시 효소 이외의 구성 요소 중 마지막에 첨가해야 합니다.

사용 예 (약 1.9 kb RNA 합성)

RNase-free Water		X ㎕
10X IVT Reaction Buffer GMP grade		2 ㎕
ATP, CTP, GTP, UTP^*1		각 10 mM
CleanCap Reagent AG (3’ OMe) ^*2		4 mM
Template DNA		0.5 ~ 2 ㎍
RNase Inhibitor		20 U
Pyrophosphatase (inorganic)		0.1 U
PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA) GMP grade		200 U
Total		20 ㎕

37℃에서 1~2시간 반응
^*1 Modified NTP를 사용하는 경우 해당하는 NTP를 동량으로 대체하여 사용
^*2 CleanCap^® Reagent AG (3' OMe) (TriLink Code N-7413-1/5/10 등)

Keyword :

in vitro transcription

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