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Alkaline Phosphatase (E. coli C75) (BAP)

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2120A	Alkaline Phosphatase (E. coli C75)	50 U	85,000원
Takara	2120B	Alkaline Phosphatase (E. coli C75)	250 U (2120A x 5)	380,000원

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제품설명

본 효소는 모든 인산 monoester 결합을 가수분해하지만 대부분의 인산 diester와 인산 triester 결합은 분해하지 않는다. 또한 ATP 등의 pyrophosphate 결합도 가수분해한다.

보존

-20℃

농도

0.5 U/㎕

형상

50 mM		Tris-HCl (pH8.0)
100 mM		KCl
1 mM		MgSO₄
50%		Glycerol

첨부 buffer 구성 (10x)

500 mM		Tris-HCl (pH9.0)
10 mM		MgCl₂

활성의 정의

p-nitrophenyl phosphate를 기질로 하여 25℃, pH8.0에서 1 분간 1 μmol의 p-nitrophenol을 유리시키는 효소활성을 1 U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

1 M		Tris-HCl (pH8.0)
1 mM		p-nitrophenyl phosphate

사용상의 주의

본 효소는 매우 안정성이 높은 효소로, 100℃의 가열에서 일시적으로 불활성화되지만 실온에 두면 활성이 되살아나므로 불활성화시키려면 적어도 2회의 페놀 처리가 필요하다.

용도

- DNA의 5’-말단 표지를 위한 전 처리, 또는 선형화된 vector의 self ligation 방지를 위한 vector DNA 단편의 탈인산화 (dephosphorylation)
- RNA의 5’-말단 표지를 위한 전 처리, 또는 RNA (혹은 DNA)의 T4 RNA Ligase에 의한 self ligation 방지를 위한 탈인산화 (dephosphorylation)

기원

Escherichia coli C 75

일반적 성질

- 분자량: 약 80,000
- Subunit
   상동의 polypeptide dimer로 이루어진 구상의 금속 단백질 1 분자당 Zn²⁺ 2분자와 인산 이온 2분자를 가지며 몇 가지의 아이소자임이 있다.
- 최적 pH: pH8 부근
- 활성화제
   Tris 등 알코올 화합물, Mg²⁺, Zn²⁺(10^-6 M)
   Zn²⁺(10^-4 M)에서는 저해
- 저해제
   무기인산, EDTA, EGTA, cysteine (2x10^-4 M), Thioglycolic acid (5x10^-3 M), Nitrilotriacetic acid (Zn²⁺에 특이적인 킬레이트제)