제품설명
PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase (Code R050A)등의 α형 DNA polymerase (Pyrobest, Pfu, Vent등 포함)에 의해 증폭된 PCR 산물의 대부분은 효소가 가지는 강력한 3'→5' exonuclease 활성에 의해 PCR 산물 양 말단이 평활화되어 그대로 TA-cloning에 사용할 수 없다. 따라서 PrimeSTAR® 시리즈에 의해 증폭된 PCR 산물을 TA-cloning에 이용하기 위해서는 3’ 말단에 dA를 부가해야 한다.
본 제품에는 PrimeSTAR® 시리즈에 의해 증폭된 산물의 3'말단에 간편하게 dA를 부가하기 위한 A-overhang mixture 와 Mighty TA-cloning Kit가 포함되어 있어, PrimeSTAR® 시리즈 (Pfu 계열의 PCR효소 포함)의 증폭산물을 간편하게 TA-cloning이 가능하도록 한 제품이다.
High Fidelity 효소 -PrimeSTAR® 시리즈별 특징
내용 (20 회)
A. Mighty TA-cloning Kit
| pMD20-T vector (50 ng/㎕) |
20 ㎕ |
Ligation Mighty Mix *1 |
2 X 50 ㎕ |
Positive Control Insert *2 |
10 ㎕ |
B. A-overhang mixture*3
| A-overhang enzyme |
10 ㎕ |
10 × Buffer |
20 ㎕ |
dATP |
10 ㎕ |
*1 DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞(Code 6023)에 포함된 시약과 동일
*2 3’ 말단에 dA overhang을 가지는 약 200 bp의 DNA fragment
(
E.coli gDNA를 주형으로
TaKaRa Ex Taq®에서 증폭, 10 ng/㎕)
*3 별도 판매하지 않음
보존 -20℃
키트 외 주요 필요 시약
- Competent cell 또는 elctroporation cell
- SOC 배지
- Ampicillin/X-Gal/IPTG 첨가 LB plate
pMD20-T vector
사용상의 주의
1. Ligation Mighty Mix는 얼음에서 천천히 녹인 뒤 사용 전 가볍게 섞어준다.
2. Transformation 후에도 cloning한 insert에 길이나 방향에 따라 LB + Amp/X-Gal/IPTG plates에서 파란색 colony가 형성될 수 있다. 이경우 colony PCR을 통해 insert DNA의 삽입 여부를 확인한다.
3. Agarose gel에서 목적 PCR 산물을 회수하는 경우 UV에 오래 조사되면 DNA가 손상되어 cloning 효율이 낮아질 수 있다.
4. PCR template으로 clone vector와 동일한 selection marker (pMD20-T vector의 경우 Ampr)를 가진 plasmid를 사용하는 경우, template plasmid가 E.coli에 transformation 되는 것을 방지하기 위해 전기영동 후 agarose gel에서 회수 및 정제한다.
관련제품
- TaKaRa Ex Taq®등 Taq 기반 polymerase의 증폭산물의 TA-cloning Mighty TA-cloning Kit (Code 6028)
- 효율 높은 TA-cloning을 위한 T-vector T-Vector pMD20 (Code 3270)
참고자료
- Cloning 실험 입문자를 위한 ‘Step by Step Cloning 가이드’
- 실험 목적별로 추천하는 Cloning Kit
