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간편한 AAV 추출시약

Extraction Solution

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	6235	AAVpro® Extraction Solution	1 Set	220,000원

Product index

Freeze/thaw, sonication이 필요없는 초 간단 추출법
AAV producing cell에 시약을 첨가하여 원심분리로 AAV 추출 완료
다양한 serotype의 AAV를 고효율로 추출 가능
Cell유래 단백질이나 핵산의 혼입 낮은 추출법

제품 설명

Adeno-Associated Virus (AAV)는 분열, 비분열 세포에 유전자 도입이 가능하며, 특히 비분열 세포에 대해 장기간 유전자 발현이 가능하며 특히, 면역원성 (immune response)이 낮아 in-vivo 실험에 최적화된 virus이다.

일반적으로 Freeze/thaw방법 또는 sonication 등을 통해 AAV producing cell로부터 AAV를 추출하지만, 이러한 방법은 시간이 많이 소요되고 번거로우며 특수한 장비를 필요로 하는 경우도 있다.
본 제품은 다카라에서 독자 개발한 AAV extraction solution 으로, 동결융해를 반복하거나 sonication 등의 번거로운 조작없이 AAV producing cell에 시약을 첨가한 후 원심분리하는 방법으로 간편하면서도 효율적으로 AAV를 추출할 수 있다.
본 제품을 이용하여 추출한 AAV는 숙주유래 단백질이나 핵산의 혼입이 적어, in vivo 실험을 위한 AAV 정제실험이나 cell infection 등 후속 실험에 적용할 수 있다.

내용

1.	AAV Extraction Solution A	25 ㎖
2.	AAV Extraction Solution B	2.5 ㎖

배양용기별 시약 사용용량

	배지 volume	0.5 M EDTA (pH8.0)	AAV Extraction Solution A	AAV Extraction Solution B
6 cm dish	4 ㎖	50 ㎕	200 ㎕	20 ㎕
10 cm dish	10 ㎖	125 ㎕	500 ㎕	50 ㎕
15 cm dish	26 ㎖	325 ㎕	1,300 ㎕	130 ㎕
T25 flask	4 ㎖	50 ㎕	250 ㎕	25 ㎕
T75 flask	13 ㎖	162.5 ㎕	650 ㎕	65 ㎕
T225 flask	40 ㎖	500 ㎕	2,000 ㎕	200 ㎕

보존 실온

적용 예 - Freeze/thaw방법과 추출효율 비교

본 제품을 이용하여 HEK293 cell (producing cell)로부터 ZsGreen 1을 포함한 AAV2를 추출하였다. AAV2 제작에는 AAVpro Helper Free System(AAV2) (Code 6230)및 pAAV-ZsGreen1 Vector (Code 6231)를 사용하였다.
Freeze/thaw방법을 비교군으로 각각 Real Time PCR에 의한 vector genome 정량 및 HT1020 cell infection을 통한 biological titer를 측정한 결과, AAVpro® Extraction Solution을 이용하여 추출한 AAV2가 더 높은 titer를 나타내는 것을 확인하였다.

그림1. AAV2 extraction 추출효율 비교 <Vector Genome 정량>

그림2. AAV2 extraction 추출효율 비교 <biological titer 측정>

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