특징
- 강력하게 발현을 조절 할 수 있는 Tet-On 3G system을 기반으로 한 all-in-one vector형태
- 낮은 백그라운드와 높은 유도발현 효율
- 10 ng/ml의 doxycycline에도 반응하는 민감도
- AAVpro system은 helper-free packaging system을 사용하며, AAV Particle 추출을 위한 추출 시약 등이 포함되어있다.
※ 본 제품은 Cloning을 위해 In-Fusion
® 시약을 함께 사용할 수 있으며, 원활한 결과를 얻기 위해
제품 사용 전 In-Fusion® 원리(동영상링크)를 반드시 참고해주시기 바랍니다.
제품설명
Tet-One System이 개발되기 전에는 Clontech의 Tet-on, Tet-off system은 response vector와 regulatory
vector(doxycycline-responsive transactivator protein)인 2개의 vector를 유전자 발현을 조절했다.
Tet-One System은 하나의 벡터에 구성요소를 모두 포함하고 있다. Tet-On
3G transactivator는 human phosphoglycerate kinase 1 promoter를 이용하여 정방향으로 발현되며, 반대
방향에는 PTRE3GS promoter를 이용하여 목적 유전자(Gene of interest)의 발현을 조절한다. 기존에
발표된 all-in-one vector system은 50~100배 정도의 유도발현 효율을 보인다. 하지만 Clontech의
Tet-One system은 all-in-one vector 형태로 최대 2500배의 유도발현 효율을 보인다.(Heinz et al,
2011).
그림. Tet-One System Mechanism - The Tet-On 3G transactivator protein is expressed constitutively from
the human PGK promoter (PPGK) but is unable to bind to the TRE3G promoter (PTRE3G) in the absence of doxycycline
(Dox). When bound by Dox, supplied in the culture medium, the transactivator undergoes a conformational change, binds to
PTRE3G and activates transcription of a transgene cloned downstream.
그림 2. Seven out of eight Tet-One clones show more than 1,000-fold induction of expression.
HeLa cells were infected with LVX-TetOne-Puro-Luc lentivirus (M.O.I. = 1) and eight individual clones were
selected and expanded according to the protocol. Each clone was analyzed for doxycycline-induced expression
of luciferase. Seven of the eight clones demonstrated more than 1,000-fold induced expression, including
two clones with 5,000-fold induction, and one clone with 10,000-fold induction.
내용 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)
* AAVpro Tet-One Inducible Expression System (AAV2) (Code 634310)
AAVpro Tet-One Vector Set (Cat. No. 634311; not sold separately)
pRC2-mi342 Vector (Cat. No. 6281; not sold separately*)
pHelper Vector (Cat. No. 6282; not sold separately*)
AAVpro Extraction Solution (Cat. No. 6283; not sold separately*)
* These components are available for separate purchase in larger quantities.
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